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2-亚氨基硫烷盐酸盐是用于硫醇化的环状硫代亚氨酸酯化合物(巯基加成)。该试剂与伯胺(-NH2)反应，引入巯基基团(-SH)，同时保持与原氨基相似的电荷性质(图1)。巯基加成后，可以特异性靶向用于各种标记，交联和固定步骤中的反应。

英文名称	2-Iminothiolane·HCl
别名	Traut's Reagent；特劳特试剂；Traut试剂；Traut's试剂
CAS号	4781-83-3
分子量	137.63
最大吸收峰	248nm(在乙腈或100mM HCl中)
消光系数	8840M-1cm-1 (±5%)(in 100mM HCl)
结构式

• 反应特异性
  Traut's试剂在pH7～9条件下，能够与伯胺自发有效地反应。它也能与脂肪和酚羟基反应，特别是在高pH下，但是这些反应的速率比与氨基反应的小100倍，当胺存在并且反应时间小于过夜时，这些反应不会明显发生。
  
• 反应缓冲液
  多种缓冲液可用于与Traut试剂进行硫醇化反应。尽管其它缓冲液，不含保持蛋白质溶解度的伯胺，能同样进行该修饰反应。蛋白质(例如抗体)或肽的修饰反应在磷酸盐缓冲液(PBS)或0.1M硼酸盐缓冲液中(pH8)最容易进行。对于核糖体蛋白质的修饰，文献中最常用的缓冲液是50mM三乙醇胺·HCl，1mM MgCl₂，50mM KCl，pH8.05。多糖修饰(仅在不存在胺时)最好在高pH下进行，例如在20mM硼砂缓冲液中，pH10。
  
• 水解速率和反应化学计量学
  
  • Traut's试剂在不含伯氨基的酸性或中性缓冲液中非常稳定。即使在碱性条件下，与伯胺的反应速率相比，水解速度也很慢。例如，在pH8的50mM三乙醇胺缓冲液中，试剂水解的半衰期约为1小时，而在同一缓冲液中与伯胺(以20mM甘氨酸的形式)反应消耗试剂的半衰期约为5分钟。
    
  • 由于相对于与胺反应的速率，水解比较缓慢，因此用Traut试剂硫醇化作用，不像其他类型的修饰试剂(如SATA，参加相关产品信息)需要一样大的摩尔过量的试剂。在大多数情况下，使用超过胺2倍摩尔过量的Traut试剂足以确保有效的修饰。对于具有许多含赖氨酸残基(很多氨基酸)的大蛋白质，调整Traut试剂在反应中的摩尔比可以控制硫醇化水平。例如，对于IgG分子(150kDa)，与10倍摩尔过量的Traut试剂反应能够确保所有抗体分子被至少3～7个巯基修饰。相比之下，几乎所有可用的伯胺(典型的IgG中约为20)可以用50倍摩尔过量的试剂进行硫醇化，但可能对抗体的功能产生不利影响。
    
  • 含有伯胺的Tris和氯化铵缓冲液在pH8时不会与Traut试剂特异性反应(消耗率分别为45和35分钟)。一般来说，蛋白质的伯胺与Traut试剂的硫醇化在1小时内能完成，而甘氨酸是比Tris更有效的淬灭剂。

• 将蛋白质溶解在非胺缓冲液pH8.0中。
  
  • 在缓冲液中加入2～5mM EDTA，螯合溶液中的二价金属，防止巯基氧化(形成二硫键)。
• 根据蛋白质的大小和浓度以及所需的硫醇化水平，向溶液中加入2～20倍摩尔过量的Traut's Reagent。
  
  • 将Traut's Reagent溶于水或缓冲液中(终浓度2mg/mL)，得到14mM的储备溶液，取所需量的试剂加入到蛋白质溶液中反应。例如，用10倍摩尔过量的Traut's Reagent，修饰10mg/mL浓度的IgG，向每毫升蛋白质溶液中加入46μL 14mM的储备溶液。
• 室温下孵育1小时。
  
• 用含有2～5mM EDTA的缓冲液平衡脱盐柱，分离硫醇化的蛋白与过量的Traut's Reagent。
  
• 可以使用Ellman试剂测试巯基。